Analyse de la sécrétion temporaire de protéine exogène dans le lait de chèvre
Identifiant du RNT
NTS-BE-950670 v.1, 27-06-2024
Identifiant national du RNT
Ce champ ne sera pas publié.
Pays
Belgique
Langue
fr
Soumission à l’UE
Ce champ ne sera pas publié.
oui
Durée du projet exprimée en mois.
60
Mots-clés
chèvre
lactation
protéine
recombinante
mRNA
Finalité(s) du projet
Recherche fondamentale: Autre recherche fondamentale
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet (par exemple, répondre à certaines interrogations scientifiques ou à des besoins scientifiques ou cliniques).
Ce projet a pour but d'étudier la production transitoire de protéine recombinante dans le lait de chèvre. Actuellement, l'expression transitoire est effectuée dans la littérature à partir de virus. Cette étude a pour but de remplacer l'utilisation des virus pouvant impacter la santé de l'animal (inflammatoire, réaction immunitaire, etc) par des particules de nanolipides chargés d'ARNm (LNP) codant pour la protéine d'intérêt.
Les buts sont multiples:
- Montrer que les LNP n'impactent ni la santé de l'animal, ni sa lactation comme supposé
- Déterminer la quantité et la durée de production de la protéine recombinante
- Etudier la similitude de la protéine produite pendant la lactation avec celle produite in vitro (glycosylation, chaine peptidique, fonctionnalité)
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet? Expliquer en quoi le projet pourrait faire progresser les connaissances scientifiques ou quels bénéfices les êtres humains, les animaux ou l’environnement pourraient en tirer à terme. Le cas échéant, distinguer les bénéfices à court terme (pendant la durée du projet) et les bénéfices à long terme (susceptibles d’être obtenus après l’achèvement du projet).
Les bénéfices de cette découvertes seront la mise au point d'un système d'expression transitoire de protéine exogène pendant la lactation des chèvres, et cela sans utiliser de virus comme vecteur, car ces derniers peuvent induire des dommages aux animaux en terme de réactions immunitaires.
Cette avancée permettra en conséquence de produire des lignées d'animaux transgéniques qu'après avoir réalisé des tests de faisabilité de production ou de recherche fondamentale.
De plus, l'expression étant transitoire, les animaux pourront être réutilisés.
Ce projet permettra de diminuer le nombre d'animaux et d'éviter la génération d'animaux transgéniques pour des recherches fondamentales.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale (par exemple, injections, procédures chirurgicales)? Indiquer le nombre et la durée de ces procédures.
Les animaux seront soumis a une injection dans la citerne de la glande mammaire de 100 à 200mL de solution de PBS (solution physiologique à 39°C) ou de solution contenant le LNP-ARNm (39°C). Ce processus s'effectue le premier jour et sera précédé de 1 à 3 lavages au PBS (39°C) de la citerne. Il sera suivi ensuite de traite régulière de l'animal en plus d'un suivi de sa santé et de sa lactation.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux, par exemple, douleur, perte de poids, inactivité/mobilité réduite, stress, comportement anormal, et la durée de ces effets?
Nous n'attendons pas d'effet indésirable sur les animaux autre que la manipulation lors de l'injection des vecteurs. Cependant, nous serons attentifs d'observer des signes d'inflammation de la glande mammaire. Nous nous attendons donc à ne pas observer d'effet indésirable.
Quelles espèces et combien d’animaux est-il prévu d’utiliser? Quels sont le degré de gravité des procédures et le nombre d’animaux prévus dans chaque catégorie de gravité (par espèce)?
Espèce
Nombre total
Nombre estimé par degré de gravité
Sans réveil
Légère
Modérée
Sévère
Caprins (Capra aegagrus hircus)
28
0
28
0
0
Qu’adviendra-t-il des animaux maintenus en vie à la fin de la procédure?
Espèce
Nombre estimé d’animaux à réutiliser, à replacer dans l’habitat/le système d’élevage ou à proposer à l’adoption
Réutilisé
Replacé dans l’habitat naturel ou le système d’élevage
Proposé à l’adoption
Caprins (Capra aegagrus hircus)
28
0
0
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Le projet permet la mise au point d'une technique dite "transitoire". Les animaux pourront donc être utilisés ultérieurement et ne seront pas sacrifiés à la suite de l'expérience.
Application de la règle des «trois R»
1. Remplacement
Indiquer quelles sont les alternatives non animales disponibles dans ce domaine et pourquoi elles ne peuvent pas être utilisées aux fins du projet.
Avant l'utilisation d'animaux, nous effectuons des tests in vitro dans des cellules de glandes mammaires de chèvres exprimant la protéine d'intérêt exogène pour vérifier la bonne expression, sécrétion et conformation de la protéine d'intérêt, mais surtout vérifier qu'aucune toxicité in vitro apparaisse. Après validation de ce modèle in vitro, nous utiliserons le modèle in vivo. Nous ne pourrons pas utiliser d'autres modèles car il n'existe aucun autre système in vitro permettant de reproduire une lactation se produisant dans un animal. En effet, ce mécanisme est très complexe et nécessite la fonctionnalité d'un organe entier.
2. Réduction
Expliquer comment le nombre d’animaux prévu pour ce projet a été déterminé. Décrire les mesures prises pour réduire le nombre d’animaux à utiliser et les principes appliqués pour concevoir les études. S’il y a lieu, décrire les pratiques qui seront appliquées tout au long du projet pour limiter le plus possible le nombre d’animaux utilisés sans perdre de vue les objectifs scientifiques. Ces pratiques peuvent notamment consister en études pilotes, modélisation informatique, partage et réutilisation des tissus.
L'étude étant exploratoire, nous avons choisi d'utiliser un faible nombre d'animaux (3 par molécules testées). La réduction du nombre d'animaux est lié à deux point importants :
1. Les glandes mammaires des chèvres possèdent deux citernes indépendantes: cela nous permet d'utiliser la même chèvre pour tester 1 molécule en plus de contrôle négatif.
2. L'expression étant transitoire, il est tout à fait possible de réutiliser ces chèvres dans d'autres projets.
3. Raffinement
Donner des exemples des mesures spécifiques qui seront prises (par exemple, surveillance accrue, soins postopératoires, gestion de la douleur, entraînement des animaux) pour réduire au minimum les effets sur le bien-être des animaux (les nuisances causées). Décrire les mécanismes permettant d’intégrer de nouvelles techniques de raffinement pendant la durée de vie du projet.
Afin d’éviter toute répétition inutile d’expérience, différentes dispositions sont prises :
• Personnel qualifié et formé à ces techniques
• Sélection des animaux sur des critères définis concernant la production laitière et le tempérament calme et docile
• Optimisation des conditions d’élevage
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents
Le choix de l’espèce caprine repose sur la rusticité de cet animal laitier permettant d’être acclimaté dans des environnements variés tout en garantissant un bon taux protéique dans le lait. Les chèvres de race Saanen sont d’excellentes chèvres laitières. Elles sont de grands gabarits, élevées généralement hors sol et possède un tempérament calme et docile.
Projet retenu pour une appréciation rétrospective
Projet retenu pour AR?
oui
Délai pour AR
10-05-2029
Raisons de l’appréciation rétrospective
Prévoit des procédures sévères
Utilise des primates non humains
Autre raison
oui
Explication de l’autre raison de l’appréciation rétrospective
La sévérité des procédures devra être réévaluée
Champs supplémentaires
Champ national 1
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Champ national 2
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Champ national 3
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Champ national 4
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Champ national 5
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Date de début du projet
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Date de fin du projet
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Date d’approbation du projet
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Code CIM 1
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Code CIM 2
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Code CIM 3
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Lien vers la version précédente du RNT en dehors du système CE