Fonctionnement des cellules du cerveau associées au comportement de reproduction des souris
Identifiant du RNT
NTS-BE-705736 v.1, 07-01-2025
Identifiant national du RNT
Ce champ ne sera pas publié.
Pays
Belgique
Langue
fr
Soumission à l’UE
Ce champ ne sera pas publié.
oui
Durée du projet exprimée en mois.
60
Mots-clés
oxyde nitrique
kisspeptine
comportement sexuel
amygdale
hypothalamus
Finalité(s) du projet
Recherche fondamentale: Système nerveux
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet (par exemple, répondre à certaines interrogations scientifiques ou à des besoins scientifiques ou cliniques).
L'objectif principal de la recherche est d'interroger les circuits neuronaux régulant les comportements sexuels en se focalisant sur la pertinence fonctionnelle d'une nouvelle population de neurones exprimant l'oxyde nitrique synthase (NOS) dans l'amygdale médiale postéro-dorsale et leur interaction potentielle avec les neurones à kisspeptine dans l'aire antéroventrale périventriculaire et la population NOS dans la partie ventrolatérale de l'hypothalamus ventromédian. Un objectif supplémentaire est de déterminer comment ces populations neuronales pourraient être affectées par le stress conduisant à un dysfonctionnement sexuel.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet? Expliquer en quoi le projet pourrait faire progresser les connaissances scientifiques ou quels bénéfices les êtres humains, les animaux ou l’environnement pourraient en tirer à terme. Le cas échéant, distinguer les bénéfices à court terme (pendant la durée du projet) et les bénéfices à long terme (susceptibles d’être obtenus après l’achèvement du projet).
Les bénéfices attendus de nos expériences sont de plusieurs ordres: d'une part, elles permettront de mieux comprendre le contrôle nerveux d'un comportement complexe chez un vertébré supérieur. Ces données pourraient servir de base à des études biomédicales ultérieures visant à résoudre des problèmes cliniques tels que le manque de libido (dysfonctionnement sexuel) et les troubles de la différenciation sexuelle, par exemple comme la dysphorie du genre. Nos travaux permettent par ailleurs de mieux comprendre les mécanismes qui contrôlent la reproduction chez une espèce animale et ils pourraient donc à long terme déboucher sur des applications pratiques dans le domaine agronomique. De plus, nos travaux analysent au niveau cellulaire l'action des stéroïdes oestrogéniques qui, on le sait maintenant, n'est pas limitée au contrôle de la reproduction mais affecte des nombreux aspects de la physiologie tels que croissance tumorale, métabolisme du calcium et ossification, fonctionnement cognitif et mémoire, etc. Les connaissances acquises pourraient ici encore suggérer des pistes de traitement de diverses pathologies.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale (par exemple, injections, procédures chirurgicales)? Indiquer le nombre et la durée de ces procédures.
Les souris seront testées pour leur comportement sexuel. Les souris seront soumises à une chirurgie stéréotaxique pour recevoir des infusions de virus ou des canules/fibres optiques pour pouvoir manipuler l'activité neuronale par l'optogénétique et/ou chimiogénétique et pour pouvoir enregistrer l'activité neuronale pendant le comportement. Les souris recevront certaines substances soit directement dans le cerveau soit par injection sous-cutanée ou par voie intrapéritonéale. Certaines groupes de souirs seront gonadectomisées pour pouvoir contrôler leurs concentrations hormonales.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux, par exemple, douleur, perte de poids, inactivité/mobilité réduite, stress, comportement anormal, et la durée de ces effets?
Le but des études est d'analyser le comportement sexuel des souris et leurs préférences sexuelles. Les tests impliqueront soit des interactions libres entre mâles et femelles, soit des choix entre partenaires dans une arène à trois compartiments. Aucun stress en particulier lié à ces procédures n'est attendu. Cependant les souris seront suivies d'une façon journalier pour assurer leur bon état de santé, surtout après avoir subi des chirurgies telles que la gonadectomie ou la chirurgie stéréotaxique.
Quelles espèces et combien d’animaux est-il prévu d’utiliser? Quels sont le degré de gravité des procédures et le nombre d’animaux prévus dans chaque catégorie de gravité (par espèce)?
Espèce
Nombre total
Nombre estimé par degré de gravité
Sans réveil
Légère
Modérée
Sévère
Souris (Mus musculus)
828
0
0
828
0
Qu’adviendra-t-il des animaux maintenus en vie à la fin de la procédure?
Espèce
Nombre estimé d’animaux à réutiliser, à replacer dans l’habitat/le système d’élevage ou à proposer à l’adoption
Réutilisé
Replacé dans l’habitat naturel ou le système d’élevage
Proposé à l’adoption
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
En règle générale, les souris seront euthanasiées pour une analyse histologique et/ou l'immunohistochimie pour vérifier l'intégration du virus dans les populations neuronales cibles, le site de l'injection et l'implantation de la canule ou fibre optique.
Application de la règle des «trois R»
1. Remplacement
Indiquer quelles sont les alternatives non animales disponibles dans ce domaine et pourquoi elles ne peuvent pas être utilisées aux fins du projet.
Nous étudions les mécanismes neuroendocriniens et génétiques dans le développement et le fonctionnement des circuits neuronaux impliqués dans le comportement. Le remplacement par des expériences ex vivo (culture cellulaire ou tissulaire, ordinateur modélisation) n'est pas possible car nous étudions des processus physiologiques. Ces interactions complexes ne peuvent être étudiées in vivo qu'en utilisant des animaux.
2. Réduction
Expliquer comment le nombre d’animaux prévu pour ce projet a été déterminé. Décrire les mesures prises pour réduire le nombre d’animaux à utiliser et les principes appliqués pour concevoir les études. S’il y a lieu, décrire les pratiques qui seront appliquées tout au long du projet pour limiter le plus possible le nombre d’animaux utilisés sans perdre de vue les objectifs scientifiques. Ces pratiques peuvent notamment consister en études pilotes, modélisation informatique, partage et réutilisation des tissus.
Les expériences utlisent habituellement des groupes expérimentaux de 10 à 12 sujets. Vu la variance connue dans les résultats obtenus précédemment, cette taille d'échantillon maximise les chances d'observer des effets biologiquement significatifs tout en minimisant la quantité de travail expérimental et le nombre de sujets utilisés. Le nombre des animaux varie en fonction des expériences proposées. Ces nombres ont été calculés en utilisant GPower pour obtenir une puissance statistique de 0,95pour alpha = 0,05 en prenant en compte une taille d'effet au minimum de 0,8 (d de Cohen ou un f équivalent de 0,4). L'effectif final par groupe prend en compte la puissance statistique mais aussi les pertes potentielles dues au risque procédural. Ces pertes potentielles peuvent être dues au fait de manquer le noyau cible lors d'une injection intracérébrale, mais aussi à la perte des sections dans le processus du découpe du tissu et d'immunomarquage. Les animaux dans lesquesl nous avons raté le noyau cible, pourront en fin servir comme contrôles supplémentaires.
3. Raffinement
Donner des exemples des mesures spécifiques qui seront prises (par exemple, surveillance accrue, soins postopératoires, gestion de la douleur, entraînement des animaux) pour réduire au minimum les effets sur le bien-être des animaux (les nuisances causées). Décrire les mécanismes permettant d’intégrer de nouvelles techniques de raffinement pendant la durée de vie du projet.
Le bien-être animal est enregistré de manière journalière, et dans certains cas, plusieurs fois par jour. Les expériences incluent très souvent des tests comportementaux journaliers, il est très aisé de se rendre compte de l'existence d'un problème de santé chez un sujet. Puis des soins post-opératoires sont données, par un traitement contre la douleur.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents
La souris présente un excellent modèle pour les expériences proposées en raison de la disponibilité de modèles transgéniques pour les neuropeptides / récepteurs stéroïdiens / enzymes de synthèse différents. En utilisant le système Cre-Lox, on peut très spécifiquement cibler une population neuronale, de la stimuler ou inhiber (par des techniques d'optogénétiques et chimiogénétiques), ainsi que d'enregister leur activité neuronale en réponse à un comportement ou une exposition à une odeur sociale ou non-sociale en utilisant la fibre photométrie.
Projet retenu pour une appréciation rétrospective
Projet retenu pour AR?
oui
Délai pour AR
31-03-2030
Raisons de l’appréciation rétrospective
Prévoit des procédures sévères
Utilise des primates non humains
Autre raison
oui
Explication de l’autre raison de l’appréciation rétrospective
Obligation légale nationale
Champs supplémentaires
Champ national 1
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Champ national 2
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Champ national 3
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Champ national 4
Ce champ ne sera pas publié.
Champ national 5
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Date de début du projet
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Date de fin du projet
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Date d’approbation du projet
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Code CIM 1
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Code CIM 2
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Code CIM 3
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Lien vers la version précédente du RNT en dehors du système CE