1. Zastąpienie
Proszę wskazać, jakie alternatywne rozwiązania bez wykorzystania zwierząt są dostępne w tej dziedzinie i dlaczego nie mogą być wykorzystane do celów projektu.
Dostępne testy in vitro/ex vivo nie pozwalają właściwie ocenić wpływu składników diet na metabolizm organizmów wyższych. Z tych względów testy in vivo są niezbędnym etapem badań. Jednakże, na etapie planowania doświadczenia zostały przeprowadzone przez nas wstępne testy vitro/ex vivo polegające na pomiarze reakcji anty-oksydacyjnych przez analizowane związki
2. Ograniczenie
Proszę wyjaśnić, w jaki sposób określono liczbę zwierząt koniecznych do celów tego projektu. Proszę opisać kroki podjęte w celu ograniczenia liczby wykorzystywanych zwierząt oraz zasady zastosowane przy projektowaniu badania. W stosownych przypadkach, proszę opisać praktyki, które będą stosowane w całym projekcie w celu zminimalizowania liczby wykorzystywanych zwierząt zgodnie z celami naukowymi. Praktyki te mogą obejmować np. badania pilotażowe, modelowanie komputerowe, dzielenie się tkankami i ponowne wykorzystywanie.
• przed przystąpieniem do badań in vivo na żywych zwierzętach laboratoryjnych dogłębnie przestudiowałem literaturę naukową celem określenia tematyki i celów, których osiągnięcie poszerzy naszą wiedzę. Nie zostaną zatem powtórzone wcześniej wykonane i dobrze udokumentowane już doświadczenia,
• w obliczeniach zostanie wykorzystana odpowiednia metoda statystyczna, m.in. dwuczynnikowa analiza wariancji oraz odpowiedni test post-hoc. Liczba zwierząt w grupie eksperymentalnej została określona z uwzględnieniem minimalnej liczby biorąc pod uwagę zastosowane podejście statystyczne (określenie wpływu czynnika głównego z wykorzystaniem n=10, czyli podwojonej liczebności jednej grupy – specyfika dwuczynnikowej ANOVA) i nasze wcześniejsze doświadczenie w prowadzeniu tego typu badań,
• dodatkowe praktyki będą polegały na dzielenie się tkankami
3. Udoskonalenie
Proszę podać przykłady konkretnych środków (np. wzmożone monitorowanie, opieka pooperacyjna, terapie przeciwbólowe, trening zwierząt), które należy podjąć w związku z procedurami w celu zminimalizowania szkód dla dobrostanu zwierząt. Proszę opisać mechanizmy wprowadzania technik w zakresie łagodzenia szkód pojawiających się w czasie trwania projektu.
• zgodnie z tą zasadą dokonano wyboru procedur i czynności, które przynosząc zakładany efekt badawczy przysporzą zwierzętom jak najmniej stresu i cierpienia,
• bezinwazyjny pomiar wartości ciśnienia tętniczego na ogonie zwierząt, po ich chwilowym unieruchomieniu,
• diety zostaną wzbogacone o związki potencjalnie prozdrowotne (potwierdzenie przydatności modelu badawczego SHR),
• zwierzęta będą utrzymywane w nowoczesnej zwierzętarni z kontrolowanymi warunkami środowiskowymi (temperatura 22-23ºC, wilgotność względna około 50-65%, wymiana powietrza 15×/h, 12 h dnia i nocy) ze stałym dostępem do wody i pokarmu,
• od momentu urodzenia, zwierzęta są przyzwyczajane do ręki człowieka, tak aby następne manipulacje przysparzały jak najmniejszy poziom stresu,
• wszelkie czynności związane z anestezją i humanitarnym uśmiercaniem będą wykonywane zgodnie z przyjętymi zasadami obowiązującej Dyrektywy 2010/63/EU, przez przeszkolone osoby z długoletnim stażem pracy ze zwierzętami laboratoryjnymi,
• zwierzęta będą miały zapewnione urozmaicone warunki bytowania (gryzaki, schowki), zgodnie z załącznikiem III Dyrektywy 2010/63/EU;
• zwierzęta będą trzymane stadnie,
Proszę wyjaśnić wybór gatunków i powiązanych etapów życia.
W planowanym doświadczeniu wykorzysta się szczury ze spontanicznym nadciśnieniem (SHR Nomenklatura: SHR/NCrl) oraz kontrolną grupę normotensyjną (WKY Nomenklatura: WKY/NCrl). Szczep z podwyższonym ciśnieniem krwi, jest wykorzystywany w badaniach nad nadciśnieniem genetycznym oraz lekami na nadciśnienie. Występowanie nadciśnienia u badanych zwierząt jest konieczne. Bez tej zmiennej niezależnej nie moglibyśmy stwierdzić czy zdrowe szczury nie wykazują nadciśnienia, bo są zdrowe, czy dlatego, że pomogły im podawane substancje.
Planowana liczba zwierząt do wykorzystania zakłada liczebność jednej grupy eksperymentalnej w danej procedurze n=10, natomiast całkowita liczba zwierząt planowych do wykorzystania to 50 SHR i 50 WKY.