Les neurones à GnRH situés dans l'hypothalamus contrôlent l'axe hypothalamo-hypophyso-gonadique, qui est responsable de tous les aspects de la fonction reproductive. La reproduction s'est détériorée dans le monde entier, comme en témoigne la prévalence croissante des troubles de la puberté et de la fertilité. La base de ce phénomène reste mal définie et nécessite une meilleure compréhension des mécanismes qui sous-tendent le contrôle physiologique de la fonction reproductive. La régulation des neurones GnRH est complexe et implique de nombreux types de cellules et de molécules de signalisation. Il est apparu que les perturbateurs endocriniens affectent la mise en place de la puberté et de la fonction reproductive. Nous avons récemment montré l’impact de l’exposition néonatale à un perturbateur endocrinien, le Bisphenol A (BPA) sur la sécrétion de GnRH et sur l’âge de la puberté chez le rat femelle. En utilisant la méthode de séquençage d’ARN, nous avons montré que l’expression hypothalamique de GPR151, était modifiée significativement après exposition aux BPA. GPR151 est un récepteur couplé aux protéines G orphelin récemment décrit et qui présente une homologie importante avec le récepteur à la galanine et à la kisspeptine, qui jouent un rôle important dans le contrôle de la sécrétion de GnRH et de la puberté. De plus, une étude récente a montré que des souris GPR151 KO présentaient une meilleure tolérance au glucose par rapport aux souris WT dans un modèle d’obésité induite par l’alimentation. Ces données suggèrent que GPR151 pourrait être impliqué dans la régulation de la libération de GnRH et/ou dans la balance énergétique. Nous avons pour but d’étudier l’expression et de décrypter le rôle de GPR151 dans la fonction de reproduction et le métabolisme chez le rat. La première partie de ce projet consiste à étudier l’expression de GPR151 au sein de l’hypothalamus au cours du développement à l’aide de real-time PCR, d’immunohistochimie et d’hybridation in situ, afin de déterminer par quels neurones est exprimé GPR151 ainsi que les variations d’expression au cours du développement. Nous étudierons également l’effet des oestrogènes sur l’expression de GPR151 au sein de l’hypothalamus du rat femelle. Pour cela, nous utiliserons des femelles en diestrus, en proestrus ou ovariectomisées pour étude de l’expression par real-time PCR et immunohistochimie.

Pour les analyses d'expression transcriptionnelle par real-time PCR, les animaux sont anesthésiés à l’isoflurane suivie d’une injection intrapéritonéale d’euthasol (concentration finale de 60 mg/ml, volume à injecter calculé en fonction du poids du rats). Les hypothalami sont ensuite prélevés et conservés à sec à -80°C avant de réaliser une extraction d’ARN. Procédure terminale Pour les études d'expression par immunohistochimie, les rats sont anesthésiés à l’isoflurane. Une injection intrapéritonéale d’euthasol est ensuite administrée (concentration finale de 60 mg/ml, volume à injecter calculé en fonction du poids du rats) puis une perfusion à la paraformaldéhyde est réalisée juste avant l'euthanasie. Les cerveaux sont extraits et conservés dans du sucrose avant d’être coupés. Procédure terminale Pour les ovariectomies, les rats sont anesthésiées à l'isoflurane pendant 10-15min (durée de l'intervention) et ils recevront une injection cutanée de Caprofen (5mg/kg) à la fin de l'intervention. Cette procédure sera réalisé 1x.

Pour identifier le ligand de GPR151 et les voies cellulaires qu'il active, nous utilisons des lignées cellulaires. Par contre, pour déterminer son expression dans le cerveau et sa fonction physiologique dans la maturation sexuelle, l'utilisation d'un modèle animal est indispensable. Pour identifier le ligand de GPR151 et les voies cellulaires qu'il active, nous utilisons des lignées cellulaires.