En este proyecto pretendemos investigar prospectivamente, en pacientes con cáncer de mama HER2 positivo (HER2+) que reciben tratamiento neoadyuvante estándar, una serie de marcadores de las células tumorales y del sistema inmune que, de manera combinada, nos permitan distinguir con un alto grado de certeza las pacientes que muy probablemente se benefician de las terapias actuales frente a aquellas en las que la situación es la contraria. En las pacientes con el subtipo de cáncer de mama llamado HER2+ (son un 20% de los cánceres de mama) los tratamientos actuales con quimioterapia y terapia molecular (anti-HER2) previos a la cirugía (conocido como terapia neoadyuvante) no dan el resultado deseado en un 40-50% de las pacientes. El resultado deseado lo llamamos respuesta completa patológica, lo que significa que la quimioterapia combinada con terapia anti-HER2 ha eliminado todas las células cancerosas del tejido mamario.Las pacientes en las que se consigue este efecto (la respuesta completa patológica) tienen muchas menos probabilidades de recaer al cabo de meses o años de la operación, que aquellas mujeres en las que después de la quimioterapia aún quedan células cancerosas en la mama (llamada enfermedad residual). Las recaídas pueden ocurrir meses o años después de la intervención y la mayoría de estas recaídas son en forma de metástasis, en órganos como hígado, pulmón o cerebro. Hoy en día, las pacientes que sufren metástasis de cáncer de mama HER2+ no pueden curarse con las terapias actuales, salvo excepciones contadas, por lo que su prevención es fundamental. Por ello, es esencial identificar las pacientes en las que este riesgo es mayor y a la vez desarrollar nuevas terapias para reducir este riesgo.

La proliferación de las células tumorales inoculadas al ratón dará lugar al crecimiento de una masa tumoral de manera subcutánea, cuyo seguimiento se llevará a cabo mediante la medición del tamaño tumoral con un calibre digital. La medición se efectuará en los diámetros transversal (t) y longitudinal (l) del tumor.

Los ratones serán sacrificados al terminar los procedimientos.

Bajo la supervisión del departamento de Bioestadística del Hospital Fundación Jiménez Díaz, hemos calculado el tamaño mínimo muestral por condición experimental para este ensayo, utilizando el software G-power. Se ha determinado que un tamaño muestral de n = 5 por grupo experimental nos permitiría obtener una potencia estadística superior al 90% con un nivel de significancia α = 0,5. El número calculado es de cinco animales por grupo por cada condición de cada serie. El diseño experimental contempla cinco condiciones, reproducidas en seis series. Esto suma un total de 150 ratones. Además, dada la experiencia previa en nuestro grupo (Zazo, 2016; Zazo, 2020; González-Alonso, 2020) hemos comprobado experimentalmente en dicho modelo animal que este tamaño muestral es el mínimo que permite obtener reproducibilidad, así garantizar un margen fiable de error estadístico para extraer conclusiones a partir de los datos obtenidos. Los animales no se reemplazarán.

Para reconocer los efectos adversos al bienestar animal, se realizará la evaluación de cambios conductuales en postura, locomoción, alimentación/peso, expresión facial, acicalamiento y actividad social (feromonas), así como identificación de conductas específicas de dolor. Se vigilará la aparición de signos que indiquen sufrimiento, como aquellos incluidos en el protocolo de supervisión del dolor y sufrimiento. Si durante el seguimiento del crecimiento tumoral, alguno de los animales presentara signos de sufrimiento, dolor o angustia se administrará analgesia con buprenorfina y se valorará la causa del dolor.

Para estudiar las mejores estrategias terapéuticas en cáncer de mama basadas en terapias dirigidas antiHER2, es indispensable contar con un modelo experimental que simule, en la mayor medida posible, las condiciones biológicas, conservando las intrincadas interacciones entre las células tumorales y las células del sistema inmunitario, que tienen lugar en el microambiente tumoral de los pacientes. Por ello, hemos escogido utilizar la especie ratón (Mus musculus). En nuestro ámbito de investigación los ratones llevarán injertada una réplica del tumor de un paciente. El tumor crecerá en el ratón en unas condiciones similares a las del cuerpo del paciente, de modo que podremos probar diferentes terapias para descubrir cuál es la mejor combinación posible que permita una translación eficaz en la clínica. Para ello, utilizaremos ratones atímicos desnudos, con inmunocompetencia parcial, porque mantienen adecuadas características inmunes que permiten un estudio estandarizado de la respuesta inmune antitumoral. La finalidad será estudiar la inmunoterapia combinada con terapia molecular que permita identificar el tratamiento potencialmente óptimo en las pacientes. Los ratones se adquirirán a un proveedor comercial. Por tratarse de cáncer de mama utilizaremos solamente hembras, debido a la prevalencia de este tipo en humanos y a la relevancia que puedan tener componentes hormonales en su desarrollo.