Inmunización de dromedarios y toma de muestras de sangre para posterior obtención de nanoanticuerpos en laboratorio (08)
Identificador RNT
NTS-ES-342075 v.1, 16-12-2021
Identificador nacional del RNT
El campo no se publicará.
País
España
Lengua
es
Presentación UE
El campo no se publicará.
sí
Duración del proyecto expresada en meses.
6
Palabras clave
nanoanticuerpos dromedarios
Finalidad del (de los) proyecto(s)
Investigación traslacional y aplicada: Enfermedades inmunológicas humanas
Investigación traslacional y aplicada: Diagnóstico de enfermedades
Objetivos y beneficios previstos del proyecto
Describa los objetivos del proyecto (por ejemplo, despejar algunas incógnitas científicas o atender necesidades científicas o clínicas).
Los sueros de camélidos contienen tanto anticuerpos heterotetraméricos convencionales como anticuerpos de cadena pesada (H) funcionales únicos (HCAbs). La cadena H de estos anticuerpos homodiméricos consiste en un dominio de unión a antígeno, el VHH (también llamado nanoanticuerpo), y dos dominios constantes. Los HCAbs no incorporan las cadenas ligeras (L) debido a la eliminación del primer dominio constante y una superficie reformada en el lado VHH, que normalmente se asocia con las cadenas L en los anticuerpos convencionales. La identificación sencilla de VHH específicos de antígenos (nanoanticuerpos) y sus propiedades bioquímicas (tamaño, afinidad, especificidad, estabilidad) así como el bajo costo de producción, han fomentado la ingeniería de producción de estos anticuerpos de dominio único para su uso como herramienta de investigación en biotecnología y medicina.
En este caso se pretende inmunizar con el péptido Liprin (LIP1) fusionado a la superficie de partículas de tipo viral PVX (Potato virus X) y AltMV (Althernantera mosaic virus), siendo ambos virus de plantas. LIP1 es un péptido que ha sido identificado como marcador serológico específico para el diagnóstico de la enfermedad autoinmune artritis reumatoide. Con la inmunización de camélidos se pretendedesarrollar nanoanticuerpos frente a dicho péptido que serán utilizados como controles positivos en tests ELISA indirecto para el diagnóstico de dicha enfermedad. La proteína Liprin-alpha-1 puede regular el desensamblaje de las adhesiones focales. Además, puede localizar receptores tipo tirosinfosfatasas tipo 2 en sitios específicos de membranas plasmáticas, regulando así posiblemente su interacción con el entorno extracelular y su asociación con sustratos. Este objetivo se encuentra enmarcado dentro del proyecto europeo H2020-774078.
¿Cuáles son los probables beneficios potenciales de este proyecto? Explique la medida en que el proyecto puede servir al progreso científico o en que, en última instancia, puede beneficiar a los seres humanos, los animales o el medio ambiente. Cuando proceda, diferencie los beneficios a corto plazo (que se producen durante el periodo de ejecución del proyecto) de los beneficios a largo plazo (que pueden generarse una vez finalizado el proyecto).
La producción de estos anticuerpos tiene como finalidad que puedan ser utilizados como reactivos para un kit de diagnosis de la enfermedad autoinmune, tanto para detección del inmunógeno en muestras de pacientes como un componente control del kit. Actualmente la forma de obtener estos componentes del kit es a través de anticuerpos purificados del suero de pacientes. Pero esto es costoso y dependiente de la disponibilidad del suero. Se pretende obtener nanoanticuerpos que serán posteriormente humanizados para producirlos en plantas.
Los nanoanticuerps de cadena sencilla derivados de camélidos se producen mejor en plantas utilizando vectores virales.
Daños previstos
¿En qué procedimientos se utilizarán normalmente los animales (por ejemplo, inyecciones, procedimientos quirúrgicos)? Indique el número de procedimientos y su duración.
En este caso, se preparará una mezcla con 800 μg de cada péptido (fusionado a PVX y a AltMV), dividida en 6 alícuotas idénticas. Se realizarán un total de 6 inmunizaciones (una por semana), utilizando una de las alícuotas para cada inmunización. Todos los antígenos están disueltos en solución salina (NaCl 0.7% o PBS) y se inocularán junto con el adyuvante necesario a una concentración de 135μg por dosis y animal.
¿Cuáles son las repercusiones o los efectos adversos previstos en los animales, por ejemplo, dolor, pérdida de peso, inactividad o movilidad reducida, estrés o anomalías del comportamiento, y cuál será la duración de esos efectos?
Se trata de proteínas recombinantes inocuas para el animal a inmunizar.
¿Qué especies y qué número de animales está previsto utilizar? ¿Cuáles son los niveles de severidad esperados y el número de animales en cada categoría de severidad (por especies)?
Especie
Número total
Cifras estimadas, por nivel de severidad
Sin posibilidad de recuperación
Leve
Moderada
Intensa
mamíferos no especificados
2
0
0
2
0
¿Qué ocurrirá con los animales que se mantengan vivos al término del procedimiento?
Especie
Número estimado de animales que deben reutilizarse, ser devueltos al hábitat o al sistema de cría o ser realojados
Reutilización
Devuelto
Realojado
mamíferos no especificados
2
0
0
Le rogamos explique los motivos del destino previsto de los animales después del procedimiento.
Los animales serán reutilizados. Los animales que se utilizan en una inmunización podrían volver a ser reutilizados tras un periodo de tiempo suficiente en el que se pueda garantizar una respuesta inmunitaria en condiciones fisiológicas normales para la especie.
Aplicación de la regla de las «tres erres»
1. Reemplazo
Indique las alternativas disponibles en este campo que no requieren el uso de animales y el motivo por el que no pueden utilizarse para los fines del proyecto.
Los nanoanticuerpos sólo se pueden obtener mediante inmunización en camélidos (dromedarios, camellos, llamas, alpacas) y tiburones. En el caso de que se tenga conocimiento de la posibilidad de obtención de nanoanticuerpos sin el uso de dromedarios, este procedimiento se paralizaría de inmediato y se sustituiría por el nuevo procedimiento. Hasta el momento no existe otra opción que utilizar dromedarios para este fin.
2. Reducción
Explique cómo se ha determinado el número de animales necesario para este proyecto. Describa las medidas adoptadas para reducir el número de animales que van a utilizarse, así como los principios que inspiran los estudios. Cuando proceda, describa las prácticas que van a seguirse a lo largo de todo el proyecto para minimizar el número de animales utilizados, de forma compatible con los objetivos científicos. Ejemplos de esas prácticas son los estudios piloto, la modelización informática, el intercambio de tejidos y la reutilización.
Se utilizan sólo dos animales por antígeno. Se emplea más de un animal para poder generar diversos nanoanticuerpos lo que es necesario para garantizar la finalidad del experimento: el aislamiento de nanoanticuerpos neutralizantes.
3. Refinamiento
Ofrezca ejemplos de medidas específicas (por ejemplo, intensificación del seguimiento, atención posoperatoria, gestión del dolor, entrenamiento de los animales) que deban adoptarse en relación con los procedimientos para minimizar los costes (daños) para el bienestar de los animales. Describa los mecanismos existentes para incorporar las nuevas técnicas de refinamiento durante la vida útil del proyecto.
La técnica a utilizar consiste en la administración subcutánea del antígeno con el adyuvante. Se realiza la inspección diaria para el reconocimiento temprano de posible malestar por las reacciones adversas a cualquier proceso de vacunación como el que se pretende desarrollar.
Explique la elección de las especies y las etapas de vida correspondientes
Camelus dromedarios adultos
Proyecto seleccionado para la evaluación retrospectiva
¿Proyecto seleccionado para la ER?
no
Plazo para la ER
Motivos de la evaluación retrospectiva
Incluye procedimientos severos
Utiliza primates no humanos
Otros motivos
Explicación del otro motivo de la evaluación retrospectiva
Campos adicionales
Campo nacional 1
El campo no se publicará.
Campo nacional 2
El campo no se publicará.
Campo nacional 3
El campo no se publicará.
Campo nacional 4
El campo no se publicará.
Campo nacional 5
El campo no se publicará.
Fecha de inicio del proyecto
El campo no se publicará.
Fecha de finalización del proyecto
El campo no se publicará.
Fecha de aprobación del proyecto
El campo no se publicará.
Código ICD 1
El campo no se publicará.
Código ICD 2
El campo no se publicará.
Código ICD 3
El campo no se publicará.
Enlace a la versión anterior del RNT fuera del sistema CE